Triphosphates de didésoxyribonucléoside
Les didésoxyribonucléosides triphosphates ( ddNTP ) sont des nucléotides d' ADN artificiels qui sont utilisés dans le séquençage de l'ADN selon Sanger . Les ddNTP sont structurés comme les désoxyribonucléosides triphosphates (dNTP). Cependant, le ribose (sucre) en position 2 'et 3' est désoxydé. En conséquence, l'atome de carbone 3 'est dépourvu du groupe hydroxyle auquel le nucléotide suivant est attaché pendant la polymérisation.
Si l' ADN polymérase incorpore un tel ddNTP à un moment donné pendant la réplication, aucun nucléotide supplémentaire ne peut être attaché et la polymérisation s'arrête à ce stade. On peut donc parler simplement de nucléotides stop.
Dans le séquençage de l'ADN de Sanger , les quatre dNTP naturels et l'un des quatre ddNTP artificiels sont maintenant ajoutés à un lot de PCR avec l'ADN à séquencer et une amorce correspondante . La polymérase incorpore maintenant occasionnellement un ddNTP dans une distribution aléatoire, ce qui arrête la polymérisation. Le résultat est un mélange de morceaux d'ADN à séquencer de différentes longueurs. Cette expérience est réalisée avec les quatre ddNTP et les quatre lots sont appliqués les uns à côté des autres dans une électrophorèse sur gel de polyacrylamide . La séquence des bases sur le segment d'ADN peut alors être lue à partir du motif des bandes résultantes.
Preuve individuelle
- ↑ Sanger, F. et al. (1977): séquençage d'ADN avec des inhibiteurs de terminaison de chaîne. Dans: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74 (12), pages 5463-5467; PMID 271968 ; PMC 431765 (texte intégral gratuit, PDF).